دانلود گزارش کار بررسی و مطالعه سلولهای گیاهی

 مهدی بنی حسن 
  بازدید : 12902
دوشنبه 02 شهریور 1394 زمان : 22:32 
 نظرات (0)

عنوان آزمایش : بررسی و مطالعه سلولهای گیاهی (رشته زیست شناسی)

تئوری
سلولهای گیاهی مانند سلولهای یوکاریوتی از سه قسمت تشکیل شده اند:
1-غشا
2-سیتوپلاسم
3-هسته
سلولهای گیاهی سه بخش مجزا دارند:
دیواره سلولی     پلاستید ها     واکوئل ها
1-دیواره سلولی:از جنس سلولز ،همی سلولز و مقدرا کمی پروتئین می باشد که وظایف آن استحکام ،شکل دهی و مقاومت سلولی در برابر فشار اسمزی و شرایط محیطی می باشد.
2-پلاستید ها:اندامک های خاص سلولهای گیاهی از پروتوپلاست منشا میگیرد که اغلب بر حسب نوع ماده ای که در آن ذخیره می شود تقسیم میکنند.
1-لوکوپلاست:بی رنگ است و در بافت های محروم از نور وجود دارد.
2-آمیلوپلاست:نشاسته
3-کلروپلاست:سبز رنگ
4-کروموپلاست:پلاست سه رنگ،رنگدانه کارتنوئیدها ،از نظر اندازه متنوع.زرد،نارنجی،قرمز
5-پروتئینوپلاست
6-اولئوپلاست
3-واکوئل:برخلاف سلولهای جانوری در گیاهان بزرگند 90% حجم سلول.توسط غشاء تونوپلاست احاطه شده.مواد آلی و معدنی رنگها.نمک آب .تنظیم تعادل اسمزی ،ذخیره سازی،دفع سموم،نگهداری سموم.
عملی
مشاهده سلولهای اپیدرمی پیاز،کاهو و تره
مشاهده بشره پیاز :ابتدا از پیازی که در اختیار داریم یک پوست نازک و شفاف که بشره بشره پیاز نام دارد جدا می کنیم.

این پوست نازک و شفاف را به دو قسمت تقسیم کرده و روی لام میگذاریم .روی یکی آب مقطر و روی دیگری لوگل میریزیم سپس لامل را روی آنها میگذاریم وزیر میکروسکوپ با بزرگنمایی 40 میبینیم.
در مشاهده با آب مقطر دیواره سلولی به راحتی پیداست ولی هسته ها مشاهده نمی شود.

در مشاهده با لوگل هسته های سلولهای اپیدرمی به خوبی رنگ آمیزی شده و قابل مشاهده است.

مشاهده بشره تره:ابتدا پوست نازک وشفافی از تره جدا کرده که همان بشره است.

سپس همان مراحل قبل را تکرار می کنیم. دو عکس زیر که یکی با لوگل و دیگری با آب مقطر است را با هم مقایسه میکنیم.

مشاهده بشره کاهو:ابتدا از برگ کاهو (نه ساقه آن)پوست نازک و شفافی جدا می کنیم و همان مراحل قبل را تکرار میکنیم.

مشاهده دیواره سلولی
به آن اسلایدی که از بشره پیاز تهیه و با لوگل رنگ آمیزی کرده بودیم با قطره چکان مقداری آب نمک به گوشه لامل میریزیم آب نمک به زیر لامل جذب میشود و سلول های اپیدرمی به دلیل اسمز آب خود را از دست داده و غشا چروکیده شده و از دیواره جدا میشود. در این حالت دیواره به راحتی قابل مشاهده است.

مشاهده پلاست ها
مشاهده آميلو پلاست در سيب زميني
يك سيب زميني را از وسط برش ميدهيم. يك برش نازك از آن بر ميداريم و روي لام ميگذاريم . مقداري آب مقطر روي آن ريخته و لامل را روي آن ميگذاريم و زير ميكروسكوپ ميبينيم.
نكته: به سيب زميني نبايد لوگل اضافه كرد زيرا باعث ميشود نشاسته سياه شود و قابل مشاهده نباشد.

كرومو پلاست در گوجه
ابتدا پوست نازكي از گوجه جدا كرده و روي لام ميگذاريم ، يك قطره آب مقطر روي آن ريخته سپس لامل را روي آن ميگذاريم و زير ميكروسكوپ مشاهده ميكنيم.

مشاهده واكوئل
ابتدا بشره برگ گياه برگ بيدي را جدا ميكنيم و روي لام ميگذاريم و مقداري لوگل روي آن ميريزيم و زير ميكروسكوپ ميبينيم.

عنوان آزمايش: اندازه گيري گلوكز خون به وسيله كيت
روش نمونه گيري: ابتدا خون را از فرد مورد نظر ميكشيم .خون بايد به 2 دليل بايد از وريد كشيده شود يكي اينكه به پوست نزديك تر است و ديگر اينكه فشارش كمتر از فشار شريان است.
خون را درون لوله آزمايش ميريزيم و صبر ميكنيم تا منعقد شود(وقتي ميفهميم خون كاملا منعقد شده كه وقتي لوله را كج، تا حد موازي با افق ميگيريم خون به صورت جامد به نظر برسد ئ از جايش تكان نخورد).
سپس خون را با سرعت چهار هزار دور در دقيقه به مدت پنج دقيقه در ساتريفيو‍‍‍‍‍ز مي گذاريم(بايد هنگام سانتريفيوز كردن درست در جهت مخالف لوله محتوي خون يك لوله هم حجم خون ميگذاريم تا تعادل برقرار شود).
پس از سانتريفيوز كردن لوله محتوي خون حاوي دو فاز جداگانه است كه فاز بالايي پلاسماي خون است و سرم مورد استفاده ما.

گلوكز به در روش آنزيمي و شيميايي قابل اندازه گيري است كه در اينجا به روش آنزيمي آن ميپردازيم.
روش آنزيمي سنجش گلوكز
سه لوله با نامهاي B T S   برميداريم و درون هر كدام يك ميلي ليتر آب مقطر ميريزيم .
به لوله T به وسيله سمپلر 10 ميكرو ليتر از سرم بيمار اضافه ميكنيم.
به لوله Sبه وسيله سمپلر 10 ميكروليتر از محلول استاندارد كيت اضافه ميكنيم.
لوله Bرا هم به همان صورت نگه ميداريم.
لوله ها را به مدت 15 دقيقه در دماي 37 درجه درون بن ماري ميگزاريم.
سپس محتواي هر لوله را درون كووت جداگانه اي ميريزيم و كووت ها را درون دستگاه اكسپكتروفتومتر ميگذاريم. دستگاه را روي طول موج 490 تا 510 نانومتر (به طور ميانگين 500 نانومتر) تنظيم ميكنيم. ميزان جذب لوله بي را اندازه ميگيريم و سپس دستگاه را صفر ميكنيم و بعدا ميزان جذب لوله هاي تي و اس را اندازه گيري ميكنيم و سپس اعداد نشان داده شده در دستگاه را در فرمول زير قرار ميدهيم تا غلظت گلوكوز خون تعيين شود.

عنوان آزمايش: مشاهده سلولهاي خوني(سفيد و قرمز)
انواع گلبولهاي سفيد:
الف : گرانولوسيت ها (چند هسته ايها) كه خود داراي گرانول اند و شامل اسيدوفيلها و بازوفيلها و نوتروفيلها هستند.
ب:آگرانولوسيتها(تك هسته ايها) كه شامل لنفوسيتها و مونوسيتها هستند.

روش تهيه گسترش از خون روي لام
یک قطره خون را به وسيله لانست از نوک انگشت خود (که قبلا با پنبه آغشته به الکل سترون شده) ميگريم و روی لام تمیزی نزدیک به لبه آن قرار ميدهیم.
اکنون لام تمیز دیگری را برميداریم و آن را بطور مورب با زاویه حدود 20 تا 30 درجه روی لام اول ميگذاريم تا خون در لبه این لام پخش شود.
لام را به ملایمت و سرعت در جهت مخالف از انتها تا ابتدا ، روی لام اول ميكشيم تا بدین ترتیب لایه دوم نازک گسترده و یکنواخت از خون روی لام اول ایجاد شود. بهترین لام گسترده در صورتی بدست می‌آید که مقدار خون کم باشد و کاملا روی لام پخش شود بطوری که فقط یک لایه از یاخته‌های خون به شکل شعله شمع روی لام ایجاد شود.
روش رنگ آميزي خون:
ابتدا به مدت 5 دقيقه سطح گسترش را با اتانول ميپوشانيم تا گسترش فيكس شود سپس به مدت 20 تا 30 دقيقه سطح گسترش را با محلول گيمسا ميپوشانيم .سپس آن را با آب جاري كه كف نكرده باشد مي شوييم و صبر ميكنيم تا خشك شود.
وقتي لام ما خشك شد روي آن يك قطره روغن ايمرسيون ميريزيم وزير ميكروسكوپ با عدسي 100 ميبينيم.

عنوان آزمايش: مشاهده سلولهاي پوششي دهان
به وسيله خلال دندان يك خراش روي لثه ايجاد ميكنيم .يك قطره سرم فيزيولو‍‍‍زي روي لام ميريزيم و محتويات سر خلال دندان را در آن حل ميكنيم .يك قطره لوگل روي آن ميريزيم و لامل را روي آن ميگذاريم و در نهايت زير ميكروسكوپ ميبينيم.

عنوان آزمايش: هيستوتكنيك (روش تهيه بافت تثبيت شده)
براي مطالعه يك بافت و اجزاي آن در زير ميكروسكوپ ضروري است كه از بافت مذكور يك لايه بسيار نازك كه ضخامت آن حدود چند ميكرون باشد تهيه شود .نظر به اينكه هر سلول داراي اجزاي فراواني است و هر يك از نظر ساختمان و مواد تشكيل دهنده با يكديگر متفاوت اند بايد روشي اتخاذ شود تا اين ساختارها براي مطالعه ميكروسكوپي حفظ شود.

روش كار:

1: كشتن حيوان --- توسط اتر و كلروفرم

2:شستن بافت --- توسط سرم فيزيولوزي / محلول تامپون

3:فيكساسيون --- فيكساتور --- فيكساتيو --- بوئن،فرمالدئيد/ زينگر

4:آب گيري --- بافت مورد نظر را به ترتيب در محلول الكل هاي 70 / 80/ 96/100 فرو ميبريم و هر كدام را يك ساعت نگه ميداريم. اين كار را دو بار تكرار ميكنيم.

5:شفاف كردن --- گزيلن/تولوئن        به مدت 1 ساعت اين كار باعث    شفافيت بافت ميشود همچنين شرايط را براي نفوذ پارافين محيا ميكند.

6:نفوذ دادن ---پارافين مذاب (70 تا 75 درجه) به مدت 45 دقيقه تا 1 ساعت.

7:قالب گيري: توسط شيشه ،فلز و ... (ير اين حالت نبايد حبابي تشكيل شود.

8:صاف كردن اطراف بلوك

9:چسباندن بلوك

10:برش گيري

11:چسباندن روي لام

12:خارج كردن پارافين:توسط حلال گزيلول(10 تا 20 دقيقه)

13:آب دادن بافت: بافت مورد نظر را به ترتيب در محلول الكل هاي 100/96/80/70/آب مقطر فرو ميبريم و در هر محلول 1 ساعت نگه ميداريم.

14:رنگ آميزي:
الف)رنگ هماتوكسيلسن براي رنگ آميزي هسته/1 يا 5 يا 10 دقيقه بسته به نوع بافت دارد.
ب)شستشو با آب جاري
پ)الكل 70       3 تا 5 دقيقه
ت)رنگ ائوزين   5 تا 10 دقيقه
ث)الكل 90         3 تا 5 دقيقه
ج)الكل 100           1 دقيقه
گزيلول         3 تا 5 دقيقه

چسب كانادا بالزام    انتلان را ميريزيم.

عنوان آزمايش:مطالعه مراحل تقسيم ميتوز
روش كار:ابتدا سه محلول مورد نياز براي آزمايش را آماده ميكنيم:

محلول A   :يك حجم HCl غليظ + يك حجم آب مقطر
محلول B :يك حجم اسيد استيك + 3 حجم اتانول 96%
محلول C :يك حجم محلول A + يك حجم محلول B

قطعه كوچكي از نوك ريشه پياز را به مدت 10 تا 20 ثانيه در محلول C قرار ميدهيم.سپس از محلول خارج كرده و چند ثانيه در محلول B ميگذاريم .سپس يك لام تميز برداشته و بافت را روي آن قرار ميدهيم ، چند قطره كريستال ويوله به آن اضافه كرده و با سوزن بافت را خرد ميكنيم.در اين صورت لامل را روي لام نهاده و با فشار انگشت آن را له ميكنيم.با دستمال كاغذي رنگ تضافي را جذب كرده و آب مقطر اضافه ميكنيم تا رنگ باقي مانده شسته شود.در نهايت با عدسي 40 زير ميكروسكوپ نگاه ميكنيم.

عنوان آزمایش: رنگ آمیزی اسپرم
اسپرم با روش رنگ آمیزی پاپا نیکولا رنگ آمیزی میشود کهبه صورت مراحل زیر است.
1-تهیه گسترش از نمونه
2-خشک شدن لام
3-فیکس کردن در الکل 70 درصد به مدت 10 تا 15 دقیقه
4-شستشو در آب
5-قرار دادن در هماتوکسیلین به مدت 10 تا 15 دقیقه (هسته رنگ میگیرد)
6-شستشو در آب
7-قرار دادن در اسید الکل 1% به اندازه یک ضربه
8-شستشو در آب
9-الکل 96 درجه به مدت 1 دقیقه
10-الکل 96 درجه به مدت 1 دقیقه
11-قرار دادن در محلول OG6 به اندازه یک ضربه
12-الکل 96 درجه به مدت 1 دقیقه
13-الکل 96 درجه به مدت 1 دقیقه
14-قرار دادن در محلول EA50 به مدت 1 دقیقه
مجموع عوامل 11 و 12 و 13 و 14 باعث رنگ آمیزی سیتوپلاسم میشود.
15-الکل 96درجه به مدت 1 دقیقه
16-الکل 96درجه به مدت 1 دقیقه
17-خشک شدن لام
ست رنگ آمیزی در شکل زیر آمده است ه رنگ ها به ترتیب کنار ه چیده شده.

پس از خشک شدن لام را زیر میکرزسکوپ میگداریم و با بزرگنمایی 100 مشاهده میکنیم.